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土壤纖維素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性測定試劑盒說明書

點擊次數:727 日期:2018/12/3 16:27:37

土壤纖維素酶(Solid-cellulaseS-CL)活性測定試劑盒說明書

分光光度法 50/24

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

S-CL主要來源于土壤微生物,S-CL催化農作物秸稈產生的葡萄糖是主要的碳源營養物質。

測定原理:

采用蒽酮比色法測定S-CL催化纖維素降解產生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯、硫酸(不允許快遞)

和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:甲苯10mL×1 瓶,4℃保存;(自備)

試劑二:液體6mL×1 瓶,4保存;

試劑三:液體40mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×1 瓶,4保存; 臨用前加入5mL 蒸餾水和45mL 濃硫酸充分溶解待用。

樣品處理:

新鮮土樣自然風干或37 度烘箱風干,過30~50 目篩。

加樣表和測定步驟:

對照管 測定管

風干土樣(g 0.1 0.1

試劑一 (μL) 100 100

振蕩混勻15min

試劑二(μL  180

試劑三(μL  740 740

蒸餾水(μL  360 180

37℃振蕩反應3h 后,90℃水浴15min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后

8000g 25℃離心10min,取上清,得糖化液

糖化液 (μL) 350 350

試劑四 (μL) 650 650

混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,620nm 處蒸餾水調零,測定吸光值

A,計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。

S-CL 活力計算:

標準條件下測定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。

單位的定義:每天每g 土樣中產生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

S-CL 活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)

T:反應時間,3h=1/8d V 反總:反應體系總體積:1.2mLW:樣本質量,0.1g

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