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堿性磷酸酶染色液

點擊次數:482 日期:2019/6/12 14:38:34

堿性磷酸酶染色液
產品簡介:
     堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組織內,其活性所需最適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內皮,還見于內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。
     堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯法(又稱同時偶聯法),其原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下細胞內堿性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯重氮鹽生成有色產物,定位于細胞質中,該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳,結果較金屬鹽沉淀法可靠。
產品組成:
產品
3*10ml
 3*20ml
Storage
試劑(A):ALP固定液
100ml
20ml
RT 避光
試劑(B): ALP 孵育液
B1:AS-BI染色液
3*2ml
5*2ml
-20℃避光
B2:FBB染色液
5ml
10ml
4℃避光
臨用前,按 B1:B2=1:1 比例混合,即為 ALP 孵育液,即配即用。
試劑(C):核固紅染色液
10ml
20ml
4℃避光
使用說明書
         1份
自備材料:
1、載玻片、濕盒
2、顯微鏡
3、4%多聚甲醛固定液(備選)
操作步驟(僅供參考):
1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定),水洗。
2、滴加配制好的 ALP 孵育液,放入濕盒中避光孵育15~20min,水洗。
3、入核固紅染色液復染 3~5min。
4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
(二) 貼壁培養細胞
1、取6孔板或其他容器培養的細胞,棄液,PBS清洗干凈。
2、加4%多聚甲醛固定10~20min,PBS 清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中避光孵育15~20min,PBS清洗。
4、入核固紅染色液復染0.5~3min。
5、PBS 清洗、鏡檢。
染色結果:
ALP 活性部位
藍色
細胞核
紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)
 
血液、骨髓涂片結果判斷:
一般以積分報告結果,根據100個中性粒細胞陽性顆粒進行 0~4+計分。
細胞分值
染色特點
0
無顆粒
1
稍有顆粒
2
中等程度顆粒
3
多數顆粒
4
充滿顆粒
臨床意義:
1、類白血病反應積分明顯增高,未經治療的慢性粒細胞白血病積分明顯減低。
2、急性細菌性感染積分明顯增高,病毒性感染積分多正常或減低。
3、再生障礙性貧血積分常增高,PNH、MDS 積分常減低。
注意事項:
1、AS-BI 染色液易失效,應避免反復凍融,臨用前低溫緩慢溶解,不可用溫水或熱水助溶。
2、ALP 孵育液易失效或降低陽性強度,即配即用,不宜久置。
3、血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮,薄厚適宜,及時固定,否則會影響酶的活性。
4、培養細胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應輕微,以免損傷或丟失細胞。
5、培養細胞或細胞爬片染色建議采用 4%多聚甲醛固定液,ALP 固定液更適用于血液或骨
髓細胞圖片的固定,染色時間應根據具體細胞特性而異。
有效期:12個月有效。

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