捷世康生物是一家專注于生命科學和生物技術領域的“新星”企業,產品及代理品牌產品范圍涵蓋了分子生物學細胞生物學免疫學生物化學等生命科學相關領域及相關實驗室消耗品

品牌中心

熱賣產品

企業動態

染色方法有哪幾種

點擊次數:231 日期:2019/8/5 16:55:42

  

染色方法有哪幾種

 

蛋白質-DNA染色法

  試劑  碘化丙啶100ug/ml,FITC  50ug/mlPBS-EDTA:含EDTA 174mg/mlPBSRNA1mg/1ml,需加熱至90℃以上30分鐘去除DNA酶。

   操作步驟  取70%冷乙醇固定的細胞(至少固定12小時以上)12×106/ml,離心,用PBS洗一次,加RNA100ul37℃消化30分鐘。加1ml  PBS-EDTA液,及FITC20ul,混勻,避光,置室溫中5分鐘,加PI 1ml,混勻。避光,置室溫中10分鐘后上機測定。

吖啶橙(AO)染色法

    注意事項  所用AO必須是Polysciences CO.產品,AO濃度應在516ug/ml。推薦用以70%冷乙醇固定的小鼠胸腺細胞為標準樣品。以確定不同型號FCM需用的最佳AO濃度。以RNA為橫坐標,DNA為縱坐標時最佳圖型應呈~型,上、下線應平行,不傾斜。凡測試標本前先以小鼠胸腺標本檢驗儀器狀態。

   AO染液易污染管道,每次實驗結束后需用漂白粉或清潔液沖洗管道,再用蒸餾水生理鹽水長時間沖洗,以使AO染液沖洗凈。

免疫抗體標記與DNA雙染色法

    操作步驟  血或骨髓用比重為1.077g/ml淋巴細胞分層液分離單個核細胞。如分層后仍含有較多的紅細胞,則可用0.83% NH4CI溶液,以3倍于細胞懸液量,15℃混勻15分鐘。或用蒸餾水溶解30秒鐘后立即加2倍量的1.8%生理鹽水以去除紅細胞。免疫標記的標本應含90%以上的活細胞。調整細胞濃度至1×107/ml。取50ul細胞懸液加第一抗體,混勻后置43060分鐘。用PBS洗細胞2次。再加第二抗體,混勻后置4℃ 3060分鐘再用PBS洗細胞2次,加入約1ml PBS,即可上機測定。或將細胞固定于2ml 70%冷乙醇或0.5%多聚甲醛。避光保存于4℃。熒光強度可保持10天不衰老減。標記后的新鮮細胞或固定細胞均可再用RNA100ul1mg/ml)于37℃中消化30分鐘,加PI 1ml100ug/ml)混勻,10分鐘后上機檢測。

DNA與ras基因蛋白檢測法

    取1.5×106細胞,固定于1ml 100%冷甲醇中,充分振搖后置于—20℃至少10分鐘。離心沉淀,棄上清液。用不含鈣、鎂的HBSSPBS洗細胞一次,離心,棄上清液、留約50ul。再加50ul PBS(含1%牛血清白蛋白)及1%羊血清,混合后置室溫中30分鐘。加50ulras MoAb(用含1% BSAPBS198稀釋)。混勻后,置冰上30分鐘。用PBS洗兩次。留約50ul上清液,加50ul FITC-兔抗大鼠抗體(該抗體需用PBS1:10稀釋),混勻后,置冰上30分鐘。用PBS洗兩次,加250ul RNA酶(500u./ml)混勻,置37℃避光保溫30分鐘,再加250ul PI50ug/ml)混勻,10分鐘后上機測定。或可加第三抗體,即FITC標記的羊抗兔抗體,以增強FITC熒光強度。

PCNA與DNA雙染色法

    1×106細胞,用1%多聚甲醛及20ug/ml Lysolecithin PBS 1ml固定2分鐘。立即離心沉淀(5000rpm1分鐘),棄上清液,輕輕振蕩沉淀物。加100%甲醇1ml,置—205分鐘,離心沉淀,棄上清液。加含0.1% NP40PBS  1ml,混勻,置冰上5分鐘。加第一抗體200ulPCNAPBS 1:100稀釋)。對照用Coulter IgG 5ulPBS 195ul,混勻,置室溫10分鐘。離心沉淀,加第二抗體FITC-羊抗鼠IgG  200ul混勻放置10分鐘。離心沉淀,加PI 500ul50ul/ml),1000u  RNA酶,混勻后置室溫20分鐘后測定。

掃一掃,關注手機網站!!!

收縮
  • 電話咨詢

  • 4009025885
請掃一掃!
现金刮刮奖下载